《女忍者忍法帖》影片背景设定在大阪落城前夜的战国乱世，丰臣家大势已去，真田幸村为保住丰臣秀赖的血脉，指派信浓的五名女忍者（お乔、お眉、お瑶、お由比、お奈美）保护怀有秀赖骨肉的千姬，并协助她们带着孩子逃离大阪城。德川家康察觉后，立刻命令伊贺五名男忍者（鼓隼人、七斗捨兵衛等）追杀女忍者，务必断绝丰臣血脉。逃亡路上，女忍者们既要应对追兵的忍术截杀，又要对抗企图强占千姬的坂崎出羽守等人，她们运用包括特殊 “性技” 在内的各种忍术周旋反击，以生命守护少主血脉，最终在惨烈战斗中完成使命。
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